Charakterisierung des Hämin-Aufnahmesystems und die Rolle des Hämins für die Eisenversorgung von humanpathogenen Bartonella-Arten

• Applicant: Dr. Anna Sander
• Subject Area: Parasitology and Biology of Tropical Infectious Disease Pathogens
• Term: from 2003 to 2005
• Project identifier: Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) - Project number 5408224

Bartonella-Arten zeigen ein streng Hämin-abhängiges Wachstum. Von den in Bartonella henselae nachgewiesenen fünf Hämin-bindenden Proteine wurden das 31-kDa und das 89-kDa Protein heterolog in der äußeren Membran von E. coli M15(pREP4) bzw. E.coli BL21(pREP4) synthetisiert, die rekombinanten Proteine in der 2D SDS-Gelelektrophorese detektiert und eine Häm-Synthese defekte Mutante von E.coli EB53 erfolgreich mit Pap31 komplementiert. In Klonen unserer Bartonelle-Genbank fanden wir weiterhin Sequenzhomologien zu Hämin-Rezeptoren von anderen Bakterien bestehend aus Rezeptor, periplasmatischem Protein und ABC-Transporter. Die genetische Manipulation von B. henselae ist uns mittels homologer Rekombination mit einer Lon-homologen Protease von B. henselae gelungen und soll nun analog auf die Gene der Hämin-bindenden Proteine übertragen werden. Basierend auf den geleisteten Vorarbeiten sollen mit diesem Antrag folgende Ziele verfolgt werden: Identifizierung und Charakterisierung des o.g. Häminrezeptors von B. henselae, der Nachweis der Häminaufnahme von Omp89 und des Hämin-Rezeptors durch Komplementierung der Häm-Synthese defekten Mutante E.coli EB53, genetische Manipulation von B. henselae zum funktionellen Nachweis der Hämin-Bindung des 89-kDA, 31-kDa und des Hämin-RezeptorProteins durch Ausschaltung des WT-Gens mittels homologer Rekombination sowie Reportergenstudien mit EGFP (Enhanced Green Fluorescence Protein) zur Eisenregulierung der Promotoren der drei häminbindenden Proteine.

• DFG Programme: Research Grants