Live-Cell-Imgaging-Messplatz mit FRET-Option

• Subject Area: Microbiology, Virology and Immunology
• Term: Funded in 2007
• Project identifier: Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) - Project number 52282314

Beantragt wird ein Live-CeIl-Imaging Messplatz, der auf die Messung des fluorescence resonanceenergy transfers (FRET) nach dem ratio-Verfahren spezialisiert ist. Ein solches System steht unsbisher nicht zur Verfügung. Dieser Messplatz wird für die Messung intrazellulärer Calcium-Konzentrationen eingesetzt werden, aber auch immer dann, wenn bei FRET-Messungen der Donorundder Akzeptor-Fluoreszenzfarbstoff auf einem Molekül lokalisiert sind. Das Mikroskop muss übereinen Monochromator zur Anregung, ein schnelles, motorisiertes Filterrad,auf der Emissionsseite undeine hochsensitive, gekühlte CCD Kamera verfügen. Dieser Live-Cell-lmaging Messplatz ist auch mitDifferential-Interferenz-Kontrast ausgestattet, so dass hier auch Lebendaufnahmen von unmarkiertenZellen (z.B. bei in vitro Wundheilungsassays) leicht möglich sind. Zusätzlich wird dieser Messpiatz miteiner Mikroinjektionsanlage ausgestattet, die es erlaubt, auch rekombinant hergestellte undaufgereinigte Proteine oder Proteindomänen, die in vitro Fluoreszenz-markiert wurden, in die zuuntersuchenden Zellen einzubringen. Die Möglichkeit zur Mikroinjektion ist für in vitroWundheilungsassays wichtig, kann aber auch für FRET-Untersuchungen eingesetzt werden, wennbeispielsweise bestimmte Interaktionspartner rekombinant hergestellt und in vitro Fluoreszenzmarkiertwerden.

• DFG Programme: Major Research Instrumentation
• Instrumentation Group: 5000 Labormikroskope
• Applicant Institution: Universität Konstanz
• Leader: Professor Dr. Christof Robert Hauck