Struktur des Initiationsproteins DnaA und seine Interaktion mit DNA

DnaA Protein ist das zentrale Protein bei der Initiation der DNA Replikation bei Bakterien. Seine Interaktion mit DNA, besonders mit dem Replikations-Origin, oriC, soll aufgeklärt werden. Folgende Teilfragen werden bearbeitet: 1. Kristallisation des DnaA Proteins von Thermus thermophilus, in Zusammenarbeit mit Prof. Dr. Wolfram Saenger, FU Berlin. 2. Mutationsanalyse der C-terminalen DNA Bindedomäne. Messung der Kintetik der DNA-Bindung mutierter DnaAs mit Hilfe von Surface Plasmon Resonance (BlAcore). 3. DnaA Komplexe mit oriC. Protein Interaktionen und die Regeln der Bindung an DNA-Fragmente mit multiplen Bindungsstellen werden analysiert mit Hilfe von Gel-Retardierung, BIAcore, Elektronenmikroskopie und KMnO4-Footprinting. 4. Laden der replikativen Helikase. Die Biochemie des lokalen Entwindens im DnaA-oriC Komplex und die Rolle von DnaA beim Laden der DnaB Helikase sollen aufgeklärt werden.

DFG-Verfahren Sachbeihilfen