Genomische Klonierung des Sister P-Glykoproteins (spgp) der Ratte und funktionelle Charakterisierung seiner Promotorregion

• Applicant: Privatdozent Dr. Thomas Gerloff
• Subject Area: Pharmacology
• Term: from 1999 to 2002
• Project identifier: Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) - Project number 5166710

Der enterohepatische Kreislauf von Gallensäuren ist von entscheidender Bedeutung für die Exkretion cholephiler Substanzen. Der geschwindigkeitsbestimmende Schritt für den Transport monovalenter Gallensäuren vom Blut in die Galle wird durch einen kanalikulären ATP-abhängigen Transporter vermittelt, dessen molekulare Identität bisher unbekannt war und der der Genfamilie der ATP-binding-cassette (ABC) Transporter zugeschrieben wurde. Wegen seiner ausgeprägten und spezifischen Expression in Lebergewebe galt das sogenannte Sister P-glycoprotein (spgp), von dem ein Teil-cDNA-Klon aus der Schweineleber isoliert wurde als ein hoffnungsvoller Kandidat für den kanalikulären Gallensäuretransporter. Der Antragsteller konnte durch die vollständige Isolierung und Sequenzierung der cDNA für Rattenleber spgp und den Nachweis von spgp vermitteltem ATP-abhängigem Taurocholattransport im Baculovirus Expressionssystem erstmals die molekulare Identität des kanalikulären Gallensäuretransporters aufdecken. Faktoren, die die Genexpression dieses Transportsystems in der gesunden und in der pathologisch veränderten Leber kontrollieren, sind bisher unbekannt. Deshalb soll zunächst genomische DNA vom spgp isoliert und die 5` flankierende Region des spgp Gens auf Strukturelemente, wie den Promotor, Enhancer und Silencer untersucht werden. Die transkriptionelle Regulation des spgp-Gens wird durch Untersuchungen verschiedener Stimuli auf die Promotor Aktivität untersucht. Einen Schwerpunkt bilden Studien über Bedingungen während der medikamenten-induzierten Cholestase, deren Ergebnisse schließlich vom Tiermodell auf die humane Situation umgesetzt werden sollen.

• DFG Programme: Research Grants