Project Details
Projekt
Dissektion der Rolle von CIC-5 und anderen vesikulären CLCs bei der renalen Endozytose und tubulären Transportprozessen
Applicant
Professor Dr. Thomas J. Jentsch
Subject Area
Nephrology
Term
from 2005 to 2013
Project identifier
Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) - Project number 16133448
CIC-5 ist ein CI-/H+-Gegenaustauscher, der insbesondere in apikalen Endosomen des proximalen Tubulus (PT) exprimiert ist. Der knock-out von CIC-5 in Mäusen führt zu einem Endozytosedefekt im PT und zur Dent schen Erkrankung im Menschen. Im cytoplasmatischen Carboxy-Terminus besitzt CIC-5 ein PY-Motiv, das über Interaktion mit WW-Domänen von Ubiquitinligasen zu einer verstärkten Internalisierung von der Plasmamembran führt. Wir wollen nun den Effekt einer Punktmutation, die die Interaktion mit Ubiquitinligasen in vitro zerstört, in vivo testen. Dazu werden wir eine knock-in Maus herstellen, bei der wir im Clcn5 Gen die entsprechende Punktmutation einbauen und die Endozytose im proximalen Tubulus untersuchen. Dies wird unter anderem durch immunzytochemische Analyse des Zeitverlaufs der Endozytose von fluoreszenzmarkierten Proteinen an heterozygoten Weibchen, die chimär für CIC-5 sind, erfolgen. Wir erhoffen uns sowohl wichtige neue Einblicke in die Rolle von CIC-5 und Ubiquitinierung für die renale Endozytose als auch Erkenntnisse über den Mechanismus der Proteinurie und anderer Symptome bei der Dent schen Erkrankung des Menschen. In einem zweiten Teilprojekt wollen wir die Beteiligung anderer endosomaler CLC an der Endozytose im PT durch Generierung und Analyse gewebsspezifischer Doppel-KOs untersuchen.
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