Proteinkristallisationssystem
Microbiology, Virology and Immunology
Final Report Abstract
Das Anfang 2010 installierte Proteinkristallisationssystem dient der automatisierten Durchführung von Kristallisationsexperimenten mit biologischen Makromolekülen. Wesentliche Vorteile sind, neben deutlich geringeren Mengen an benötigten Proben, eine hohe Reproduzierbarkeit sowie eine automatische Bildaufzeichnung der Kristallisationstropfen zu mehreren Zeitpunkten. So kann die Entstehung von Kristallen gut verfolgt und mit Negativkontrollen verglichen werden. Der hohe Durchsatz des Gerätes ermöglicht es sehr viele Kristallisationsbedingungen in kurzer Zeit zu testen bzw. zu optimieren. Das Gerät ist auch Teil der zentralen Infrastruktur für den SFB 860 (Integrative Strukturbiologie dynamischer makromolekularer Komplexe), wo es für viele Kristallisationsversuche im Rahmen von SFB-Projekten eingesetzt wird. Seit Inbetriebnahme wurden mit dem Gerät ca. 960.000 Kristallisationstropfen pipettiert und analysiert. Aus den erhaltenen Kristallen wurden bislang 45 Kristallstrukturen bestimmt, wobei die Koordinaten der verfeinerten Strukturen in der „Protein Data Bank“ (PDB) deponiert wurde und somit frei zugänglich sind. Die wichtigsten Projekte, für die das Gerät benutzt wurde, betreffen die kristallographische Strukturaufklärung der spleißosomalen RNA-Helikasen Prp2 und Prp43, der RNA-modifizierenden Enzyme 4-Thio-Uridin-Synthetase und Dnmt2, der Velvet-Transkriptionsfaktoren VosA und VelB, der intramolekularen Chaperone von Tailspike-Proteinen und von mehreren Enzymen im Lipid-Stoffwechsel. Durch diese Kristallstrukturen konnten wesentliche Beiträge zum Verständnis der Funktion dieser Proteine geleistet werden. Hervorzuheben sind auch eine Reihe von ultra-hochaufgelösten Kristallstrukturen von Thiamindiphosphat abhängigen Enzymen, durch die fundamentale neue Einsichten in den katalytischen Mechanismus dieser Enzyme gewonnen wurden.
Publications
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